新冠抗体识别表位研究及相关应用

2021
04/23

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了解免疫学早期快速诊断的关键靶标N蛋白的检测抗体的表位,以及中和抗体识别表位,将有助于诊断试剂开发、药物研发及疫苗保护效力评价。


前言

抗体的功能取决于其与抗原结合的表位。抗体因结合表位不同而发挥特定的功能,如激活或抑制活性。了解抗体识别表位有助于评价抗原检测的精准度。而丰富表位的对照抗体,也常用于疫苗效果评估。因此,筛选不同表位抗体,可应用于新冠病毒检测及疫苗保护效力评估等方面。


SARS-CoV-2属于单股正链RNA病毒,基因组分为非结构基因和结构基因。其中非结构基因含有两个开放阅读框(ORF1a和ORF1b),编码16个非结构蛋白(Nsp1到16),而结构基因则编码4个蛋白:S、E、M、N。

Genome organization of SARS-CoV-2 (图源参考文献1)

Nucleocapsid(N)蛋白因其高丰度表达,是新冠免疫学快速诊断试剂的关键靶点及开发阻断核糖核蛋白组装的抗病毒药物的潜在靶点。Spike(S)蛋白承担病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能,是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。

从GISAID收集的2019年12月至2020年11月,约22.3万份SARS-CoV-2蛋白质组完整序列,发现新冠各蛋白正在以不同的速度进化。其中E蛋白突变程度较低,而N和S蛋白则表现出更高程度的变异。突变为病毒提供了增加传播性、改变致病性和逃避宿主免疫的机制,可能改变抗原反应并导致对治疗方法的耐药性,甚至导致疫苗保护失效。


 
因此,了解免疫学早期快速诊断的关键靶标N蛋白的检测抗体的表位,以及中和抗体识别表位,将有助于诊断试剂开发、药物研发及疫苗保护效力评价。


SARS-CoV-2 Anti-N 抗体识别表位研究


以SARS-CoV-2 N全长 (Cat: 40588-V07E, 1M-419A),N-NTD (Cat: 40588-V07E10, 49T-175G)和N-CTD (Cat: 40588-V07E5, 248K-365P; Cat: 40588-V07E6, 248K-407L) 重组蛋白作为检测样本,检测义翘神州自主研发制备的12株Anti-N单抗识别表位。结果显示:8株单抗识别N-NTD,4株单抗可能识别N蛋白的C tail端。

 

SARS-CoV-2 Anti-N MAbs Epitopes

 (A: N-NTD, 49T-175G;B: N C tail, 366T-407L)


SARS-CoV-2 Anti-N 配对抗体用于N抗原检测


义翘神州   自主研发高亲和力、高特异性Anti-N抗体,已成功试配出20+组优秀的抗体配对(见附表),可用于双抗夹心检测SARS-CoV-2 N抗原,其中多株抗体已作为快速诊断原料供应国内外IVD公司。其中多组检测灵敏度高,对天然样本识别好的配对抗体均识别N-NTD表位。  
 


SARS-CoV-2 Anti-N 抗体可识别突变N蛋白


相对于S蛋白,N蛋白突变频率低的多,但仍发现有一定突变频率。研究发现突变大多发生在N-NTD和N-CTD两个功能区以外的无规则柔性区。  

 
作为免疫学快速检测的重要靶标,Anti-N抗体对重要N突变蛋白的识别能力关系到检测准确度。义翘神州研制的Anti-N抗体能识别多个高频率突变的新冠重组N抗原。  
 

蛋白货号

突变位点

lineage

40588-V07E1

N(R203K,G204R)

高频突变,出现在B.1.1.7、B.1.351、P.1等

40588-V07E2

N(P13L)

高频突变,出现在B.1.1.7、B.1.351、A.2.2等

40588-V07E3

N(S194L)

高频突变,出现在B.1.1.7、B.1.237等

40588-V07E4

N(I292T)

高频突变,出现在B.1.1.7等

40588-V07E8

N(D3L,S235F)

B.1.1.7的特征突变

Notes: SARS-COV-2 lineages and corresponding geological locations of origin: B.1.1.7--UK, B.1.351--South Africa (SA), P.1--Brizil (BRA)


SARS-CoV-2 中和抗体识别表位研究


义翘神州自主研发筛选到多株新冠RBD中和单抗,检测中和单抗对非突变RBD和突变RBD的结合。结果显示,个别单抗对RBD (K417N、E484K、N501Y) (   Cat: 40592-V08H85)和RBD (K417T、E484K、N501Y) (   Cat: 40592-V08H86   )识别能力显著下降,提示中和抗体可能识别RBD蛋白的不同表位。
 

The binding of SARS-CoV-2 Neutralizing MAbs to RBD and RBD Mutations


SARS-CoV-2 中和抗体对突变RBD中和能力评估

Spike蛋白更容易发生突变,这可能是由于它在进入宿主细胞和改变感染性方面的关键作用。不同位点突变带来不同的蛋白结构与功能变化。义翘神州采用ELISA竞争法检测抗体对重组RBD蛋白的中和能力。结果表明,各抗体对不同RBD蛋白的中和能力有差异。说明RBD突变可能导致治疗性中和抗体失效,因此筛选识别不同表位的中和抗体具有重要意义。  
 

Neutralizing Ability to Spike RBD Mutants


Notes: Wild type(Cat#: 40592-V08H); RBD (N501Y)(Cat#: 40592-V08H82) ; RBD (K417N, E484K, N501Y)(Cat#: 40592-V08H85) 


附表. 新冠抗原ELISA检测抗体对


_

Capture Ab

Detection Ab

Pair 1

40143-R004

40143-R040

Pair 2

40143-MM05

40143-R001

Pair 3

40143-MM08

40143-R004

Pair 4

40143-MM08

40143-MM05

Pair 5

40143-MM05

40143-MM08

Pair 6

40588-R0002

40588-R0006-1

Pair 7

40143-MM05

40588-R001

Pair 8

40588-MM123

40588-R001

Pair 9

40143-R040

40588-R001

Pair 10

40588-MM123

40588-MM124

Pair 11

40143-R040

40588-MM124

Pair 12

40588-MM124

40143-R040

Pair 13

40143-R004

40588-R001

Pair 14

40143-R004

40588-MM124

Pair 15

40588-MM122 &

 40588-MM124

40588-MM128

Pair 16

40588-MM137 &

 40143-MM05

40588-MM128

Pair 17

40588-MM137 &

 40143-MM05

40588-R704

Pair 18

40588-R957

40588-MM128

Pair 19

40143-R004

40588-RB30

Pair 20

40143-R004

40588-RB89

Pair 21

40143-R004

40588-RC02

Pair 22

40143-R004

40588-RA84

New pairs will be updated continuously

  • Ab Epitopes: N-NTD (49T-175G)

  • Ab Epitopes: N C tail (366T-407L)

  • Ab Epitopes: TBD


参考文献:

1. Ya Peng, et al., Structures of the SARS-CoV-2 nucleocapsid and their perspectives for drug design. EMBO J (2020)39:e105938.

2. Qiaozhen Ye, et al., Architecture and self-assembly of the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein. Protein Science (2020) Volume29, Issue9, Pages 1890-1901.

3. Daniel Wrapp , et al., Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation. Science(2020), Vol. 367, Issue 6483, pp. 1260-1263.

4. Islam, M. R, et al., Genome-wide analysis of SARS-CoV-2 virus strains circulating worldwide implicates heterogeneity. Sci. Rep. 2020,10, (1), 14004.

5. Korber, B , et al., Tracking Changes in SARS-CoV-2 Spike: Evidence that D614G Increases Infectivity of the COVID-19 Virus. Cell 2020, 182, (4), 812-827.e19.

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关键词:
新冠,抗体,突变,单抗,疫苗,检测

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