细胞核分子遗传学技术

知识点1：细胞遗传学技术的含义

细胞遗传学技术主要是指通过制备染色体标本，分析染色体数目和结构改变与人类疾病之间的关系。

知识点2：细胞和分子遗传学技术

近代分子生物学技术与细胞遗传学技术相结合，便形成了细胞和分子遗传学技术。其中，比较成熟、具有实用价值的技术有：①荧光原位杂交（FISH）；②比较基因组杂交（CGH）。

知识点3：荧光原位杂交的原理

荧光原位杂交的原理就是应用荧光素标记DNA探针与样本（细胞涂片或厚石蜡切片）中的组织杂交情况，在荧光显微镜下显示与其相应的染色体某个特定区段或整条染色体。这些探针一般包含1×10¹-1×10⁶碱基的核苷酸序列，可以应用间期细胞和分裂中期细胞分析。探针类型一般有着丝粒探针、全染色体探针与位点特异性探针等几种类型，用于不同目的的检测。检测染色体易位的位点特异性探针又分为融合探针与分离探针，不同荧光标记的探针显示出不同颜色，由此来检测染色体的改变。

知识点4：荧光原位杂交的应用

荧光原位杂交（FISH）能够有效地检测染色体结构和数目的异常，因此适宜用于染色体的易位、缺失和扩增。

⑴着丝粒探针的应用：可以发现肿瘤性和非肿瘤性疾病中染色体的获得与丢失，例如：B-慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤中的+12，产前检查时一般采用位点特异性探针评估染色体异常与做性别鉴定。

⑵位点特异性探针的应用：可以用于造血组织肿瘤和软组织肉瘤的诊断和预后判断。

FISH分析检测还可以用于检测乳腺癌中HER2/neu基因扩增、多形性胶质瘤中EGFR基因扩增、神经母细胞瘤中MYCN基因扩增，以及检测染色体特异性位点缺失，用于诊断疾病和估计预后。

知识点5：比较基因组杂交（CGH）的原理

比较基因组杂交的原理是分别提取肿瘤细胞与正常淋巴细胞中的DNA，然后用不同荧光染料染色后进行杂交，比较肿瘤细胞和正常细胞中所有染色体上的整个基因组，查看是否存在整条染色体或某些区段的增加或减少。

知识点6：比较基因组杂交与传统的细胞遗传学分析方法的不同之处

比较基因组杂交与传统的细胞遗传学分析方法的不同主要在于，比较基因组杂交仅仅依赖于可得到的基因组肿瘤DNA，不需要肿瘤分裂中期细胞或特异性探针；比较基因组杂交可以从新鲜组织或石蜡包埋组织中提取DNA进行检测。

知识点7：比较基因组杂交的应用

比较基因组杂交主要用于检测染色体及其区段的缺失和重复，即染色体的丢失、获得及基因扩增。

但是，比较基因组杂交不能用于检测染色体易位、倒位、倍体改变及点突变。