常用免疫组织化学技术
基本理论
知识点1:免疫组织化学技术
免疫组织化学技术是采用已知抗体或抗原在组织切片上检测组织和细胞中相应未知抗原或抗体的一种特殊组织化学技术,此技术是一种特异性强、敏感性高的检测方法,将形态、功能与物质代谢密切结合在一起,目前已成为现代病理诊断学上最重要的常规技术。
知识点2:免疫组织化学检测所用的抗体
当前免疫组织化学检测所用抗体多达上千种,主要分为多克隆抗体与单克隆抗体两大类,这两类抗体的优缺点见表。
抗体 | 优点 | 缺点 |
多克隆抗体 | 制备方便,敏感性高,部分多克隆抗体也有较强的抗原特异性 | 总体上非特异性交叉反应较多,抗血清效价不太稳定 |
单克隆抗体 | 抗体特异性强,质量与效价稳定,可根据需要随时批量生产,非特异性交叉反应少 | 敏感性相对较低,有些单克隆抗体只能在冷冻切片上染色 |
知识点3:免疫组织化学检测方法
免疫组织化学检测方法有很多,目前应用最多的是PAP法(过氧化物酶-抗过氧化物酶法)与ABC法(亲和素-生物素复合物),其次有B-SA法(生物素-链霉亲和素法)与APAAP法(碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法)和EnVison法(多聚体标记二步法)。
知识点4:免疫组化染色常用的检测显示系统
免疫组化染色常用的检测显示系统见表
检测系统 | 产物颜色 | 封片 |
HRP-DAB | 棕色 | 中性树胶 |
HRP-AEC | 红色 | 甘油 |
AKP-BCIP/NBT | 深蓝色 | 中性树胶 |
知识点5:上皮性标志物
目前,最常用的上皮性标志物是角蛋白(CK)和上皮膜抗原(EMA),其他还有桥粒蛋白、包壳蛋白、紧密连接蛋白、刷状缘蛋白、CD109与p63等。
知识点6:非上皮性标志物
非上皮性标志物主要是指与上皮性标志物相对的标志物,一般包括波形蛋白(Vimentin)、肌组织、内皮、组织细胞、间皮、黑色素细胞与细胞外间质等多种标志物。
知识点7:淋巴造血组织标志物
淋巴造血组织,特别是淋巴细胞在其发育和分化过程中能形成许多分化性抗原,应用相应抗体能区分出免疫表型不同的细胞系及同一细胞系的不同亚型核不同分化的细胞群。这些标志物在现代淋巴瘤和白血病的诊断和分型中非常重要。
淋巴造血组织标志物主要包括:白细胞共同抗原、免疫球蛋白、全B细胞标志物、全T细胞标志物、NK细胞相关标志物、淋巴细胞不同分化阶段或亚群相关标志物,以及组织细胞、树突细胞和髓细胞相关标志物等。
知识点8:神经组织标志物
神经组织标志物主要包括:胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经微丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶NSE、微管相关蛋白(包括MAP2和MAP-Tau)、S-100蛋白等。
知识点9:内分泌和神经内分泌系统标志物
内分泌和神经内分泌系统标志物的具体内容见表。
标志物 | 具体内容 |
神经内分泌细胞一般标志物 | 主要有嗜铬颗粒蛋白A(CgA)和突触囊泡蛋白(Syn),其他有CD56、NSE、蛋白基因产物9.5和组胺酶等,除NSE定位在细胞核内,其余标志物均定位在细胞质中 |
激素及其相关产物标志物 | 包括垂体激素(ACTH、GH、LTH、TSH和LH),胃肠胰和呼吸道神经内分泌细胞产生的激素(5-羟色胺、胰岛素、胰高血糖素、胰多肽、胃泌素、生长抑素、血管活性肠肽、胃泌素释放肽、P物质等)和其他激素(肾上腺素、去甲肾上腺素、甲状腺素、甲状旁腺素、降钙素、性激素和HCG等) |
知识点10:器官或组织特异性抗原标志物
器官或组织特异性抗原标志物的具体内容见表。
序号 | 抗原标志物 | 具体内容 |
1 | 前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)和前列腺特异性膜抗原(PSMA) | 这几种标志物对转移性前列腺癌具有较高的特异性和敏感性,阳性反应定位在细胞质中 |
2 | α-甲基乙酰辅酶A消旋酶 | 用于前列腺癌与前列腺增生的鉴别以及证实转移性癌起源于前列腺 |
3 | 甲状腺球蛋白(TG) | 可用于证实转移性甲状腺癌,其敏感性随肿瘤的分化程度而异,阳性反应定位在细胞质中。TG还可在卵巢及甲状腺类癌中表达 |
4 | 甲状腺转录因子-1(TTF-1) | TTF-1表达于甲状腺滤泡上皮、呼吸性和肺泡上皮细胞及其相应的肿瘤,阳性反应定位在细胞核内,TTF-1比TG敏感,但特异性比TG低。在甲状腺癌中能表达于甲状腺乳头状癌、滤泡性癌和髓样癌,而通常不表达于甲状腺间变性癌。在肺癌中能表达于腺癌和小细胞肺癌,不表达于鳞癌 |
5 | 表面活性脱辅基蛋白A(SP-A) | II型肺泡细胞和60%-70%的肺腺癌表达SP-A |
6 | 天冬氨酸蛋白酶 | 在II型肺泡细胞、肺泡巨噬细胞和肾近曲小管上皮中表达,也在肺腺癌中表达,阳性反应定位在细胞质中,呈颗粒状,其敏感性比TTF-1稍高,阳性强度和阳性率随恶性程度增高而降低 |
7 | α乳白蛋白和乳珠蛋白A | 这两种标志物有较高的特异性和敏感性,用于证实转移性乳腺癌 |
8 | 巨囊病液体蛋白-15 | 表达于伴有大汗腺成分或大汗腺化生的乳腺肿瘤中,也出现在一些无大汗腺分化的乳腺癌中 |
9 | 胰淀粉酶和α1抗胰蛋白酶(AAT) | 对于外分泌胰腺及相应的肿瘤有一定特异性,但特异性低,目前很少应用 |
10 | 胚胎碱性磷酸酶(PLAP)和OCT4 | PLAP表达于各种生殖细胞肿瘤,包括精原细胞瘤、无性细胞瘤、胚胎性癌和卵巢囊瘤,阳性反应定位在细胞膜上。OCT4表达于其他生殖细胞肿瘤中 |
知识点11:肿瘤相关抗原标志物
肿瘤相关抗原标志物的具体内容见表。
标志物 | 具体内容 |
神经内分泌细胞一般标志物 | 主要有嗜铬颗粒蛋白A(CgA)和突触囊泡蛋白(Syn),其他有CD56、NSE、蛋白基因产物9.5和组胺酶等,除NSE定位在细胞核内,其余标志物均定位在细胞质中 |
激素及其相关产物标志物 | 包括垂体激素(ACTH、GH、LTH、TSH和LH),胃肠胰和呼吸道神经内分泌细胞产生的激素(5-羟色胺、胰岛素、胰高血糖素、胰多肽、胃泌素、生长抑素、血管活性肠肽、胃泌素释放肽、P物质等)和其他激素(肾上腺素、去甲肾上腺素、甲状腺素、甲状旁腺素、降钙素、性激素和HCG等) |
知识点10:器官或组织特异性抗原标志物
器官或组织特异性抗原标志物的具体内容见表。
序号 | 抗原标志物 | 具体内容 |
1 | 癌胚抗原(CEA) | 现已知除结直肠腺癌外,其他起源于胃肠道(包括胰腺)的腺癌和肺腺癌以及甲状腺髓样癌都可以表达CEA。此外,乳腺、汗腺、膀胱和宫颈等部位的癌偶尔也表达CEA,阳性反应定位在细胞膜或细胞质 |
2 | α-甲胎蛋白(AFP) | 肝细胞癌和卵黄囊瘤表达AFP,阳性反应定位于细胞质中。此外,肝样腺癌、胰腺腺泡细胞癌和具有生殖细胞样特点的癌也可表达AFP |
3 | CA-125 | 卵巢浆液性肿瘤和子宫内膜腺癌表达CA-125,而卵巢黏液性肿瘤不表达此抗原。阳性反应定位于细胞质中或细胞膜上 |
4 | CA19-9 | 大多数胰腺和胆管腺癌及尿路上皮癌表达CA19-9,阳性反应定位在细胞质中。CA19-9偶尔可在胃癌、肺腺癌和乳腺癌中表达 |
5 | BCA-225 | 为乳腺癌相关糖蛋白,主要在乳腺癌中表达,也可在宫颈、卵巢、肺和肾癌中表达,特异性不高 |
6 | 肾细胞癌标志物(RCC) | 一种在肾细胞癌鉴别诊断上较有用的标志物,最好与一组阳性标志物和阴性标志物共同标志 |
7 | HMB45 | 一种用恶性黑色素瘤提取物制备的单克隆抗体,是与不成熟黑色素小体相关的癌胚糖结合物,可能与酪氨酸酶系统相关 |
应用指征及分析判断
知识点1:常见上皮样细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别
常见上皮样细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别见表。
肿瘤 | CK | Vim | SMA | Des | CD34 | CD31 | S-100 | HMB45 | 其他标志物 |
差分化癌 | + | - | - | - | - | - | - | - | EMA+ |
上皮样肉瘤 | + | + | - | - | +/- | - | - | - | INI1-/+ |
恶性间皮瘤 | + | + | - | - | - | - | - | - | Calretinin+, D2-40+ |
上皮样滑膜肉瘤 | + | + | - | - | - | - | - | - | TLE1+ |
上皮样平滑肌肉瘤 | -/+ | + | + | + | - | - | - | - | h-caldesmon+ |
上皮样血管肉瘤 | -/+ | + | - | - | - | + | - | - | FLI1+ |
上皮样胃肠道间质瘤 | - | + | +/- | - | - | - | -/+ | - | CD117+, DOG1+ |
腺泡状软组织肉瘤 | - | + | - | - | - | - | - | - | TEF3+ |
肾外恶性骨骼肌样瘤 | +/- | + | - | - | - | - | - | - | INI1- |
透明细胞肉瘤 | - | + | - | - | - | - | + | + | melanA+ |
血管周上皮样细胞瘤 | - | + | +/- | - | - | - | -/+ | + | TFE3+/- |
恶性黑色素瘤 | - | + | - | - | - | - | + | + | melanA+ |
知识点2:常见梭形细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别
常见梭形细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别见表。
肿瘤 | CK | Vim | SMA | Des | CD34 | CD31 | S-100 | HMB45 | 其他标志物 |
梭形细胞癌 | + | -/+ | - | - | - | - | - | - | p63 |
滑膜肉瘤 | + | + | - | - | - | - | - | - | TLEI+ |
纤维肉瘤 | - | + | -/+ | - | - | - | - | - | |
平滑肌肉瘤 | - | + | + | + | - | - | - | - | h-caldesmon+ |
恶性周围神经鞘瘤 | - | + | - | - | -/+ | - | +/- | - | CD57+/-, MBP-/+ |
恶性孤立性纤维性肿瘤 | - | + | - | - | + | - | - | - | CD99+/-, bcl-2+/- |
梭形细胞骨骼肌瘤 | - | + | - | + | - | - | - | - | myogenin+, myoD1+ |
血管肉瘤 | - | + | - | - | + | + | - | FLI1+ | |
恶性黑色素瘤 | - | + | - | - | - | - | + | + | melanA+ |
知识点3:常见多形性细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别
常见多形性细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别见表。
肿瘤 | CK | Vim | Des | CD34 | S-100 | HMB45 | CD68 | LCA | 其他标志物 |
多形性癌 | +/- | -/+ | - | - | - | - | - | - | p63-/+ |
恶性纤维组织细胞瘤 | - | + | - | - | - | - | +/- | - | SMA-/+ |
多形性骨骼肌肉瘤 | - | + | + | - | - | - | - | - | myogenin+, myoD1+ |
多形性脂肪肉瘤 | - | + | - | - | +/- | - | - | - | MDM2+, CDK4+ |
去分化脂肪肉瘤 | - | + | - | -/+ | -/+ | - | - | - | MelanA+ |
恶性黑色素瘤 | - | + | - | - | + | + | - | - | CD30+ |
间变性大细胞淋巴瘤 | - | + | - | - | - | - | - | +/- | ALK+ |
知识点4:常见小圆细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别
常见小圆细胞恶性肿瘤免疫组织化学鉴别见表。
肿瘤 | CK | Vim | Des | CD99 | NF | Syn | S-100 | LCA | 其他标志物 |
小细胞癌 | + | - | - | - | - | +/- | - | - | TTF-1+/- |
Merkel细胞癌 | + | - | - | - | - | -/+ | - | - | CK20+ |
腺泡状骨骼肌肉瘤 | - | + | + | -/+ | - | - | - | - | myogenin+ |
Ewing肉瘤/PNET | - | + | - | + | - | - | - | - | FLI1+ |
促结缔组织增生小圆细胞肿瘤 | +/- | + | +/- | - | +/- | -/+ | - | - | WT-1+ |
神经母细胞瘤 | - | + | - | - | + | + | - | - | NB84+ |
恶性黑色素瘤 | - | + | - | - | - | - | + | - | HMB45+ |
恶性淋巴瘤 | - | + | - | -/+ | - | - | - | - | CD20+akCD3+ |
粒细胞肉瘤 | - | + | - | - | - | - | - | -/+ | MPO+ |
知识点5:小B细胞淋巴瘤免疫组织化学鉴别
小B细胞淋巴瘤免疫组织化学鉴别见表。
肿瘤 | CD20 | CD5 | CD23 | CD10 | cyclinD1 | CD21 | CD38 | CD43 | ANXA1 |
小B淋巴细胞淋巴瘤 | + | + | + | - | - | - | - | + | - |
滤泡性淋巴瘤 | + | - | -/+ | + | - | - | - | - | - |
套细胞淋巴瘤 | + | + | - | - | + | - | - | + | - |
淋巴浆细胞淋巴瘤 | + | - | - | - | - | - | +/- | - | - |
MALT边缘区淋巴瘤 | + | - | - | - | - | +/- | -/+ | +/- | - |
淋巴结边缘区淋巴瘤 | + | - | - | - | - | - | - | +/- | - |
脾边缘区淋巴瘤 | + | - | - | - | - | - | - | - | - |
毛细胞淋巴瘤 | + | - | - | - | - | - | - | - | + |
知识点6:内分泌和神经内分泌肿瘤的诊断
检测神经内分泌标志物CgA与Syn可确定起源于内分泌或神经内分泌细胞。检测各种激素及其相关蛋白能够进一步区分不同类型的神经内分泌肿瘤。如甲状腺滤泡上皮来源表达TG,胰腺的胰岛素瘤表达胰岛素。需要注意的是,免疫组织化学标记激素产物呈阳性反应时并不一定表明是功能性的神经内分泌肿瘤,还必须有相应的临床症状存在,才可以做出诊断,如诊断胰岛素瘤必须临床上有低血糖的症状,否则即使免疫组织化学或血清中检出胰岛素,也不能诊断为胰岛素瘤,只能诊断有胰岛素产物的神经内分泌肿瘤。
知识点7:转移性恶性肿瘤原发部位的确定
如淋巴结转移性肿瘤表达角蛋白、TG与TTF-1,则提示肿瘤来源于甲状腺;如表达角蛋白、TTF-1与PE10,不表达TG,则提示肿瘤来自肺癌转移;如不表达角蛋白而表达S-100蛋白与HMB45,则提示恶性黑色素瘤转移。骨转移性癌如表达PSA与PAP,则提示肿瘤来自前列腺。鉴于几乎所有抗体的特异性均是相对的,故应用免疫组织化学技术来证实转移性肿瘤的原发部位时,应当采用一组阳性和阴性标志物,才能做出准确诊断。

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