microRNA临床FAQ

microRNA临床FAQ

Q1：检测外周血中的游离microRNA应该使用血浆样品，还是血清样品？

A：现有研究表明，血清（非抗凝管收集）和血浆（抗凝管收集）作为不同的起始检材，都能够很好的检测到游离microRNA，且不会显著性地影响到检出microRNA的种类，还是含量。

较多的研究表明，血浆中microRNA的检出量会略高于血清样品，但这不排除是由于血浆样品中会有较高概率发生不同程度的血小板污染所造成。但另一方面，血清样品的microRNA的检测结果，可能会受到血清制备时的凝血时间及温度波动而影响。

Q2：检测血浆中的游离microRNA，应该使用何种抗凝剂包被的抗凝管？

A：市面上常见的抗凝管，除了肝素包被管不适合用于收集检测游离microRNA的血液收集管，其他包被材料都可以（如EDTA，枸橼酸钠等）。肝素包被管不适合的原因是，肝素会严重抑制PCR扩增酶的活性，从而影响了microRNA的后期检测。

Q3：游离microRNA能够作为肿瘤诊断的标志物么？

A：游离microRNA，已经在多种实体瘤中（包括肝癌，胰腺癌等）用于肿瘤诊断。游离microRNA，是否能够作为肿瘤早期筛查的标志物，这样的研究尚较少（因为这种研究通常耗时会较长）。从目前游离microRNA的性质上来，microRNA有成为肿瘤早期筛查和诊断有效标志物的巨大潜力，原因有以下几点：

1. microRNA的表达具有一定的组织、细胞类型特异性。现在已经在很多肿瘤中，发现了很多肿瘤类型相对特异的microRNA（事实上，已经有一些前卫性的miRNA panel产品，尝试用于不明确原位肿瘤类型的转移癌的区别性诊断，如 ProOncTumorSource Dx，Rosetta Genomics等，但是这些产品尚处于临床实验阶段，且主要针对组织样品）。

2. microRNA的检测方法灵敏度较高（基于PCR的方法），这使得我们有可能在肿瘤早期即检测到血液中拷贝数很低的microRNA。

Q4：游离microRNA能够作为预测肿瘤预后的标志物么？

A：可以。例如在非小细胞肺癌中，已有研究表明可以通过4个小microRNA来预测患者术后的生存率和复发率【 J Clin.Oncol. 2010, 28(10): 1721-1726】。一些microRNA还可以作为检测肿瘤负荷的标志物，在治疗过程中评估肿瘤对药物的响应【 PloS one2013, 8(6): e66842. 】

Q5：冻存的血清或血浆是否能够用于游离microRNA的分析？

A：microRNA由于其本身序列长度较小，且其大部分不是以裸露形式存在于血液中，故表现出较强的稳定性。长期冻存的血清/血浆样品（长达数年）都可稳定检测出游离microRNA，已有研究表明反复的冻融（如下图，多达6次冻融的测试）也不会显著性影响游离microRNA的稳定性。这也是microRNA其作为生物标志物最大的优势之一。

但是仍建议在开展血液中游离microRNA项目时，尽快处理血液至血清/血浆制品，这主要是防止血液中溶血，裂解的血细胞释放的RNA会严重干扰游离microRNA的检测。

Q6：游离microRNA是否只限于肿瘤标志物的研究？

A：游离microRNA的应用远不止肿瘤标志物，大量研究已经证实它能够用来监测和评估很多疾病的进展，例如慢性炎症，急性器官损伤，心血管疾病等。microRNA作为标志物的核心生物学要素，就是在特定的病理情况下，能够有相当数量的疾病相关细胞（或者是病原——肿瘤细胞，或者是响应细胞——肝损伤中的肝实质细胞）发生同步化的信号通路变化，这就诱发了释放大量的、易检测到、疾病相关的游离microRNA。