T细胞导向疗法中双抗的空间因素

 双抗形式取决于作用目的   

 

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此外，为了系统地研究抗原表位位置在T细胞导向疗法中的作用，实验人员通过将表皮生长因子（EGF）样结构域作为相对刚性的结构间隔物，设计了一系列表达BCMA抗原的细胞系，这些细胞系以不同的EGF样结构域作为系链，以增加到靶细胞膜的距离。

 

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研究发现，在24小时的效应器靶标比（E:T比）为5:1时，所有三种分子在诱导T0细胞系裂解方面表现出几乎相等的活性，T0细胞系在细胞表面呈现BCMA而没有任何栓系。随着到细胞表面的距离随着EGF样结构域数量的增加而增加，双特异性IgG2诱导T细胞定向裂解的能力迅速减弱，而Db和DbFc在细胞系T0到T5中显示出相当强的细胞毒性，T6和T7中的效力显著降低。

 

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这说明双特异性抗体分子使T细胞与靶细胞接近的程度对免疫突触形成的效率有重要影响。全长IgG和Db衍生分子的差异可以用两个抗原结合位点的臂距来解释，因为Db和DbFc结构更为坚硬和紧凑，导致T细胞和抗原表达细胞之间的距离相对较短，当超过T细胞活化的距离阈值时，双抗的杀伤功能就会明显下降。

长结合臂对膜近端抗原更有效

然后实验人员检查了相反的情况，抗原表位位于膜的近端区域，并被其上不同数量的结构单元所掩盖。

 

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于没有任何掩蔽的M0v细胞系，两种分子在15小时和24小时的时间点显示出几乎不可区分的EC50和Emax，24小时的数据清楚地显示出更高的最大杀伤率和显著的左移EC50。对于M2v和M4v，在15小时的时间点，DbFc活性明显低于基于IgG的分子。

然而，这两种分子的剂量-效应曲线在24小时时趋于一致，这个结果可能是由于T细胞活化的动力学差异导致，在足够长的时间内，EGF样结构域可能具有一定的结构灵活性，允许暴露膜近端BCMA抗原。对于M7v细胞系，即使在24小时，DbFc的Emax也稳定在约50%，低于基于IgG的分子，这表明在这种情况下，即使是柔韧性也不能克服空间位阻来补偿DbFc桥接CD3和BCMA的低概率。

 

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靶向不同表位的双抗与体外活性的关系

为了深入了解表位位置如何影响双抗的细胞杀伤活性，实验人员在过度表达FLT3的EoL1急性髓系白血病（AML）细胞系上设计并研究了多种FLT3/ CD3双特异性抗体分子。FLT3是一种受体酪氨酸激酶，其胞外结构域由五个Ig样结构域组成。

 

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结果显示，与一系列表达BCMA的工程细胞系的研究结果一致，针对FLT3不同结构域的双特异性分子显示出显著不同的细胞毒性，其受到分子形式的强烈影响。靶向膜远端结构域D1和D3的DbFc介导了比其IgG对应分子更有效的细胞毒性，可能是由于其使两个细胞膜紧密结合的能力。

 

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另一方面，针对膜近端结构域D4和D5的IgG双特异性分子诱导特异性靶细胞裂解，而对于DbFc形式的相同抗FLT3抗体，在高达10 nM的浓度下未观察到显著的细胞毒性。