今天复习经典 — 罗氏电化学发光,
抗原抗体的免疫反应过程与吖啶酯直接发光,酶催化发光别无二致。这里不做表述。有兴趣了解抗原抗体反应和利用磁珠洗脱的同学,可以观看后面全流程的视频。
电化学反应过程:
- 工作电极上(阳极)加一定的电压能量,二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 释放电子发生氧化反应,成为三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+
- 同时,电极表面的TPA释放电子发生氧化反应,成为阳离子自由基 TPA+ ,并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基 TPA·
- 具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+
- 具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA· 发生氧化还原反应。三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ ,
- 激发态 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 以荧光机制衰变并以释放出一个波长为 62Onm 光子的方式释放能量,而成为基态的 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 。
- 上述化学发光过程后,反应体系中仍存在二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 和三丙胺(TPA),使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行,这样,整个反应过程可以循环进行。
通过上述的循环过程,测定信号不断的放大,从而使检测灵敏度大大提高,所以 ECL 测定具有高灵敏的特点。对于刚进IVD的新同学,可以看下面这个全流程视频,它包括抗原抗体的免疫反应的部分,以及利用磁珠洗脱的部分,和最后电化学发光的部分。
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