非小细胞肺癌RET基因融合的检测方法与比较概述

宜昌市中心人民医院

病理科 王晓璐

非小细胞肺癌RET基因融合的检测方法包括免疫组化（IHC）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光原位杂交（FISH）、NGS和循环肿瘤DNA（ctDNA）检测等，这些方法各有其优缺点，因此我们在工作中需要结合具体情况针对性使用。

免疫组化（IHC）检测方法具有普及面广、价格经济等优点，适合基层单位开展多种肿瘤的靶向治疗初筛（例如广泛应用的Her-2、ALK等）。但目前RET抗体在临床上的应用效果并不理想，有很多经过RT-PCR证实的病例，其对应的IHC染色结果不但可以出现假阴性，也可以出现假阳性；大多数RET抗体为多克隆，阳性信号定位于细胞质中，着色较弱，判读时也容易与背景着色相混淆。另外，目前RET的IHC阳性判读标准尚未统一，在判读时假阳性率高。

逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

目前RT-PCR已被广泛用于RET融合基因的筛查，是检测RET融合的重要工具之一。它的优点在于适合鉴定常见的融合类型，包括KIF5B-和CCDC6-等，具有准确性高，特异性强的优点；同时暴露出的缺点是，RT-PCR只能用于鉴定已知的RET融合类型。

荧光原位杂交（FISH）的原理是利用报告分子标记核酸探针，然后将探针与染色体或DNA上的靶DNA杂交，若两者同源互补，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。利用报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，在荧光显微镜下对DNA进行定性、定量或相对定位分析。

FISH是检测融合基因的金标准，它的优点在于敏感性好，并且检测时无需考虑融合类型；但FISH的试剂盒价格昂贵，同时还需要经过专业培训后的病理医生进行判读，这些缺点也限制了它在临床上的应用。

下一代测序技术（NGS）是一种迅速处理大量DNA的方法。实现下一代DNA测序的基本原理是在纳米空洞中配置纳米电极，用电测方法测量一个DNA的核酸碱基排列。

Zhao等人通过NGS对2755例肺癌患者进行了检测，发现其中36例非小细胞肺癌发生了RET融合现象；在此之后，各国学者通过NGS进一步研究在非小细胞肺癌中发现了15种较少见的RET融合基因，包括NCOA4-RET、RUFY2-RET、NCOA1-RET、ANK3-RET、RET-CUBN、RASSF4-RET、FRMD4A-RET、TRIM33-RET、CLIP1-RET、ERC1-RET、KIAA468-RET、KIF13A-RET、TRIM24-RET、WAC-RET和 MYO5C-RET。NGS对小的活检标本、靶细胞丰度较少的标本都能进行检测，但其缺点在于检测数据量极大，判读耗时耗力，价格昂贵。

循环肿瘤细胞DNA（ctDNA）来源于肿瘤细胞，在很多肿瘤类型中都广泛存在，属于液体活检的一种。据文献报道，在肿瘤Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者中，ctDNA的检出率分别为47%、55%、69%、82%，且血液中ctDNA的浓度随着肿瘤的进展而增加。ctDNA具有非侵入式检测的优点，对于已无法进行活检的患者尤为有用，但NCCN指南指出，ctDNA的假阴性率较高，至少为30%。

参考文献：

1. Wang R, Hu H, Pan Y, et al. RET fusions define a unique molecular and clinicopathologic subtype of non-small-cell lung cancer [J]. J Clin Oncol, 2012, 30(35): 4352-4359.

2. Zhao J, Li Q, Lin G, et al. Mutation profiling and treatment choosing of Chinese RETpositive advanced lung cancer patients [J]. J Clin Oncol, 2017, 36(suppl): e21139.