双特异抗体平台—LegoBody

2021
03/05

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求实医药
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据报道,目前已经有超过100多种双特异抗体结构形式。这些抗体大致可以分为两类:含Fc的双特异抗体和不含Fc的双特异抗体。对于含Fc的双抗可以进一步分为两类——对称型和非对称型。对于非对称型双特异抗体,如何使抗体正确配对是生产中的难点,为了解决该问题,目前已经有多种技术平台被开发出来,今天给大家介绍一种平台LegoBody(乐高抗体)

LegoBody的设计中主要应用了凝血酶(Thrombin),该酶切割序列专一性强,水解效率高,被广泛用于切割标签。凝血酶的最佳切割位点是X4-X3-P-R/K-X1-X2,其中X4X3是疏水氨基酸,X1X2是非酸性氨基酸。该抗体平台由加州大学旧金山分校Liu Bin 团队开发(2019年在预印本杂志biorxiv发表)。其双特异抗体设计如图1所示。为了防止抗体重链的错配,其采用了常规的Knob-In-Hole技术;为了防止抗体轻链的错配,将抗体的轻链通过linker(GLVPRGSGSGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGSGGLVPRGS与对应的抗体重链相连接,该linker的在轻链的C端和重链的N端都加入可以被凝血酶水解的序列(GLVPRGS),当抗体纯化后,利用凝血酶将linker切割,从而形成不含linker的双特异抗体。

1LegoBody双特异抗体设计

经过酶切后,在抗体轻链的C端有GLVPR五个氨基酸残留,在重链的NGS两个氨基酸残留,但是这些残留的氨基酸不影响抗体的结合活性(图2

图2:ELISA检查双抗结合活性(Ipilimumab:Ipili, Daratumumab:Dara)

除了可以很方便的构建双特异抗体外,LegoBody还可以很容易的构建三特异或者多特异抗体(图3)

图3:LegoBody构建的多特异抗体

总结

LegoBody可以像乐高一样随意的将不同靶点抗体进行组合,甚至可以在抗体的末端加入纯化标签如His-Tag或者Twin-Strep-Tag,只需要在Tag和抗体之间加入凝血酶位点即可在纯化后清除Tag序列,该技术的缺点是凝血酶酶切后会有氨基酸序列残留,另外,通过linker连接后,抗体链序列较长可能会影响抗体的表达。

本文由作者自行上传,并且作者对本文图文涉及知识产权负全部责任。如有侵权请及时联系(邮箱:nanxingjun@hmkx.cn
关键词:
双特异抗体,凝血酶,氨基酸,重链,轻链

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