黄海明博士 | 噬菌体展示技术在抗体发现和抗体工程方面的应用

黄海明博士：

这个图是示意图，由于专利还在保密阶段，这个图不代表真正的数据。简单解释一下，左侧MorphoSys这张图表示CDR H3区的氨基酸组成，它是统计了大量天然抗体得出在该位点(比如第95位)哪些氨基酸出现频率高，根据数据计算出的比例，然后根据比例设计文库。我们可以看到每个位点的比例，有些位点大同小异，但很多依旧是不同的，尤其是最后三个。图中两列，D(左侧柱)代表design，是期待值，L(右侧柱)代表library，是最终合成所得比例。

右侧我们自己的图是一张示意图，建库思想是类似的，但不是我们文库真实的氨基酸比例，是根据文献阅读和我工作中的经验，配合计算机统计得到的建库方案，所以这里我用X代替(氨基酸序列)。理论上每个人都可以构建自己独特的文库，因为X位点是基于自己定义的。

黄海明博士：

肯定的，任何技术都有它的优势和劣势、长短之分。噬菌体展示技术存在问题：最终(得到)的抗体，尤其是制药用的抗体，需要在真核细胞中表达纯化，而噬菌体展示技术得到的抗体在细菌中表达展示，因此没有翻译后的修饰，需要后期进一步鉴定。当然这些位点可以在早期通过计算机分析软件筛选出来，例如糖基化位点或某些不需要的位点。

这个技术的优势在于，它能在抗体筛选早期筛选到较多候选抗体，比如我们最近为一个客户筛选出30多个单克隆抗体，这是很多的，因为最终需要的抗体数可能是1-2个，噬菌体展示技术可以为他们提供足够的候选抗体，方便他们下游进行进一步筛选、取舍。这样的好处能够弥补一定的不足。

黄海明博士：

我觉得不是技术本身的点，而是比如说免疫原性，或者CDR区的抗原性如何评价，这样一些在杂交瘤技术中同样存在的问题。比如杂交瘤技术中，从老鼠体内取出的抗体，虽然是天然抗体，但它的免疫原性依旧需要鉴定。这一点不能算是不好突破，应该说是最大的硬伤，但我们谈技术不会介意谈它不好之处，我们了解了这些不足之处后避开即可。当然我觉得噬菌体展示技术在抗体工程方面有很大的优势，在抗体生成方面也不差，有些人可能不喜欢合成抗体文库，我们也可以为他们构建天然抗体文库，规避免疫原性的问题，这些都是有办法解决的。

黄海明博士：

首先，(项目)非保密的情况下，希望客户能向我们提供尽可能多的信息，比如蛋白的名称、分子量大小、蛋白的大致类型，一般来说是可溶性蛋白、有表达纯化折叠功能的蛋白，因为变性蛋白是不能筛选也无法得到筛选结果的。另外需要一些蛋白的基本特点，例如SDS-PAGE胶，如果这个抗原有已知的抗体(benchmark)，最好能对这个抗原进行简单的ELISA实验验证蛋白功能，这样有利于我们后期筛选。如果能提供Fc-Tag、GST-Tag、Avi-Tag会更有利于我们的工作。

如果客户需要对靶标保密或者态度更谨慎，至少需要保证抗原蛋白生物物理特性是没有问题的，其他信息可以不要求。

当然，无论客户是否要求，我们都会对客户信息严格保密。

黄海明博士：

纳米抗体现在是很火的，它的优点在于分子量小，同时具有常规抗体的特点，稳定性强、亲和力高，有利于结合一些常规抗体不能接触到的抗原表位，比如GPCR的活性位点。另外纳米抗体是单链形式，仅有3个CDR区，便于构建文库，不像常规抗体双链结构有6个CDR区，构建文库更麻烦。

目前我们没有发现纳米抗体明显的缺点，当然它肯定有不好的一面，只是我们暂时没有发现，以后如果有新的发现我再为大家解释。