黄海明博士 | 噬菌体展示技术在抗体发现和抗体工程方面的应用

2021
02/24

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联埠生物
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       1月26日晚7点,联埠资讯第二场“联埠新知汇”线上直播活动中,上海亚联抗体医药有限公司董事长、多伦多大学研究员、CCAB中心研发科学家黄海明博士,分享了噬菌体展示技术在抗体发现和抗体工程方面的应用,系统讲解了噬菌体展示技术及相关应用,并对观众提出的问题进行了解答。

       由于篇幅有限,上一篇【直播回顾】黄海明博士 | 噬菌体展示技术在抗体发现和抗体工程方面的应用中对直播核心内容进行简要总结,现将直播中问答环节的完整内容整理如下。

Q&A

Q1

刚看到您这边介绍您的合成文库,有张图。您可以给我们介绍一下这个文库图吗?我们不是很清楚,这图中每一条都代表什么。

黄海明博士:

这个图是示意图,由于专利还在保密阶段,这个图不代表真正的数据。简单解释一下,左侧MorphoSys这张图表示CDR H3区的氨基酸组成,它是统计了大量天然抗体得出在该位点(比如第95位)哪些氨基酸出现频率高,根据数据计算出的比例,然后根据比例设计文库。我们可以看到每个位点的比例,有些位点大同小异,但很多依旧是不同的,尤其是最后三个。图中两列,D(左侧柱)代表design,是期待值,L(右侧柱)代表library,是最终合成所得比例。

右侧我们自己的图是一张示意图,建库思想是类似的,但不是我们文库真实的氨基酸比例,是根据文献阅读和我工作中的经验,配合计算机统计得到的建库方案,所以这里我用X代替(氨基酸序列)。理论上每个人都可以构建自己独特的文库,因为X位点是基于自己定义的。

Q2

噬菌体展示技术与传统抗体发现技术相比有何优势和劣势?

黄海明博士:

肯定的,任何技术都有它的优势和劣势、长短之分。噬菌体展示技术存在问题:最终(得到)的抗体,尤其是制药用的抗体,需要在真核细胞中表达纯化,而噬菌体展示技术得到的抗体在细菌中表达展示,因此没有翻译后的修饰,需要后期进一步鉴定。当然这些位点可以在早期通过计算机分析软件筛选出来,例如糖基化位点或某些不需要的位点。

这个技术的优势在于,它能在抗体筛选早期筛选到较多候选抗体,比如我们最近为一个客户筛选出30多个单克隆抗体,这是很多的,因为最终需要的抗体数可能是1-2个,噬菌体展示技术可以为他们提供足够的候选抗体,方便他们下游进行进一步筛选、取舍。这样的好处能够弥补一定的不足。

Q3

噬菌体展示技术有哪些难突破之处?

黄海明博士:

我觉得不是技术本身的点,而是比如说免疫原性,或者CDR区的抗原性如何评价,这样一些在杂交瘤技术中同样存在的问题。比如杂交瘤技术中,从老鼠体内取出的抗体,虽然是天然抗体,但它的免疫原性依旧需要鉴定。这一点不能算是不好突破,应该说是最大的硬伤,但我们谈技术不会介意谈它不好之处,我们了解了这些不足之处后避开即可。当然我觉得噬菌体展示技术在抗体工程方面有很大的优势,在抗体生成方面也不差,有些人可能不喜欢合成抗体文库,我们也可以为他们构建天然抗体文库,规避免疫原性的问题,这些都是有办法解决的。

Q4

如果我们需要贵公司提供服务,需要给贵公司提供什么材料?有具体要求吗?

黄海明博士:

首先,(项目)非保密的情况下,希望客户能向我们提供尽可能多的信息,比如蛋白的名称、分子量大小、蛋白的大致类型,一般来说是可溶性蛋白、有表达纯化折叠功能的蛋白,因为变性蛋白是不能筛选也无法得到筛选结果的。另外需要一些蛋白的基本特点,例如SDS-PAGE胶,如果这个抗原有已知的抗体(benchmark),最好能对这个抗原进行简单的ELISA实验验证蛋白功能,这样有利于我们后期筛选。如果能提供Fc-Tag、GST-Tag、Avi-Tag会更有利于我们的工作。

如果客户需要对靶标保密或者态度更谨慎,至少需要保证抗原蛋白生物物理特性是没有问题的,其他信息可以不要求。

当然,无论客户是否要求,我们都会对客户信息严格保密。

Q5

您讲的过程中提到了纳米抗体,您能和我们简要说说纳米抗体的优缺点吗?

黄海明博士:

纳米抗体现在是很火的,它的优点在于分子量小,同时具有常规抗体的特点,稳定性强、亲和力高,有利于结合一些常规抗体不能接触到的抗原表位,比如GPCR的活性位点。另外纳米抗体是单链形式,仅有3个CDR区,便于构建文库,不像常规抗体双链结构有6个CDR区,构建文库更麻烦。

目前我们没有发现纳米抗体明显的缺点,当然它肯定有不好的一面,只是我们暂时没有发现,以后如果有新的发现我再为大家解释。

本文由作者自行上传,并且作者对本文图文涉及知识产权负全部责任。如有侵权请及时联系(邮箱:nanxingjun@hmkx.cn
关键词:
噬菌体,黄海明,氨基酸,抗体,技术

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