如何系统全面的评价qPCR仪!

来源公众号：原博士带你做检测，转载已获授权。

荧光定量PCR的检测离不开荧光定量PCR试剂和荧光定量PCR仪器。试剂的评价前面已经讲了（诊断试剂评价系列2-核酸检测方法（更正））。但是每次提到荧光定量PCR仪的评价，大家总是望而却步。一方面原因是荧光定量PCR仪涉及很多温度、光电信号需要专业的设备来评估，另一方面也确实不知道从哪里入手。今天我梳理一下评价荧光定量PCR仪的指标和方法。由于本人非计量相关专业，文中可能存在错误，本文仅供参考，大家可以参照相关标准进行评价。

一、荧光定量PCR仪评价的核心指标

二、荧光定量PCR仪的温度性能试验相关指标

通过物理方法测定PCR性能的试验。主要包括测定温度和荧光来进行评价，由于需要专业的设备，建议联系计量部门或仪器厂家进行相关指标的测定。

编辑并运行一个温度循环文件，在55±5℃，72±5℃，95±5℃各取一个温度点，设置恒温2min，5次循环，随机选取≥6个点位。温度差值在±1℃范围内。                                                                                                                     

 

1. 温度持续时间准确度：
   编辑并运行一个45℃和95℃之间循环的文件，设置温度≥1min，连续记录5个循环，温度持续时间与设定温度时间偏差在±5%以内。
    
2. 平均升温速率：50℃-90℃应不小于1.5℃/秒。
   
3. 最大升温速率：50℃-90℃应不小于2.5℃/秒。
4. 平均降温速率：90℃-50℃应不小于1.5℃/秒。
5. 最大降温速率：90℃-50℃应不小于2.0℃/秒。

1. YY∕T 1173-2010 聚合酶链反应分析仪
2. JJF1527-2015 聚合酶链反应分析仪校准规范
3. SN/T 2102.2-2008 食源性病原体PCR检测技术规范 第2部分：PCR仪性能试验要求
4. JJF(津)04-2020 实时荧光定量 PCR 仪校准规范
5. JJF（苏）222-2019 实时荧光定量PCR仪校准规范