新冠核酸检测治疗评价报告出炉,对于各地检验都有参考意义

2020
04/13

+
分享
评论
医殇宏哥
A-
A+
关于核算检测你了解多少呢?

综合检验医学网、第一财经等信息

25721586733479025

核酸检测是新型冠状病毒肺炎确诊的重要手段,从提取到完成扩增检测需要建立一个复杂且稳定的体系。由于国内有众多的核酸提取试剂以及各种不同的操作程序和实验体系,因此各实验室分析的敏感性和特异性也存在差异。为了解我国新型冠状病毒(2019⁃nCoV)核酸检测的开展现状及质量状况,国家卫生健康委临床检验中心(以下简称“临检中心”)于2020年3月16日~24 日开展了2019⁃nCoV 核酸检测室间质量评价,并将检测结果进行了统计分析。

近日,国家卫健委临检中心公布了2020年《全国新型冠状病毒核酸检测室间质量评价结果报告》。根据报告,本次室间质评共涵盖全国范围的包括疾控中心、公立医疗机构(综合性医院、专科医疗机构、妇幼保健机构)、独立医学实验室、海关所属国际旅行医疗保健中心、试剂研发厂家、科研院所在内的1296家实验室,共计收到844家实验室的有效结果(即回报结果完整、在截止日期内回报的结果),其中合格实验室701家(83.1%),不合格实验室143家(16.9%),实验室总体检测情况良好。

结果统计

据悉,本次质评共发放12个质评样本,各参评实验室回报结果与官方标准答案完全相符判定为合格。质评样本均为国家卫生健康委临床检验中心制备,为基因工程方法制备的噬菌体病毒样颗粒模拟样本,无生物传染危险性。该样本适用于NMPA批准的新型冠状病毒核酸检测试剂,19种未批准的商品化试剂和32家不同实验室自建方法。12个质评样本中,进行统计的样本为10个。

这次质评含有5份阳性样本,病毒基因载量分别为8×104拷贝/毫升,1.6×104拷贝/毫升,3.2×103拷贝/毫升,640拷贝/毫升和128拷贝/毫升L。

“这5个样本的选定,对于病毒载量高样本以及最低样本,意义不是很大,超过3200拷贝/毫升是必须检出阳性率的,主要的问题存在于对3.2×103拷贝/毫升和640拷贝/毫升两个弱阳性样本的检出能力。”一位参与诊断试剂测试的人员表示。

据了解,根据临床研究数据表明,呼吸道和非呼吸道样本中新型冠状病毒载量平均为3.21×104拷贝/毫升(2.21×102~4.71×105拷贝/毫升),呼吸道样本中新型冠状病毒载量平均为4.33×104拷贝/毫升。另一研究表明,痰液样本浓度较高(中位数7.52×10⁵拷贝/毫升),咽拭子样本浓度较低(中位数7.99×10⁴拷贝/毫升)。由于能获取痰液的患者有限,临床上鼻咽拭子采样更为普遍。因此,本质评样本基本符合临床样本中病毒载量的情况。

从质评报告可以看出,各临床实验室在1.6×104拷贝/毫升以上浓度水平,符合率均可以达到97%以上。其次,合格实验室701家(83.1%)。

而对于3.2×103拷贝/毫升的阳性率平均为94.6%,640拷贝/毫升的阳性率为84.9%。

“从这些数据看,中国新冠病毒的诊断试剂总体质量是符合标准的。不过,由于各家诊断试剂选择的技术不同,不同技术之间存异,假阴性和假阳性是诊断试剂客观存在的现象。即便是1%的几率,也是存在的。”上述检测人员表示。

表:2020 年全国新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本信息

74531586733479203

表:各样本总体符合率和复检率

48941586733479352

在实验室使用试剂方法上,各实验室使用的提取方法包括手工-柱提取法、自动化仪器-柱提取法、手工-磁珠提取法、自动化仪器-磁珠提取法和裂解法。提取试剂提取试剂种类较多,包括国家药品监督管理局(NMPA)批准的新型冠状病毒检测试剂配套的核酸提取试剂以及其它核酸提取试剂。

表:各阳性样本不同试剂检测结果符合率和复检率

65831586733479449

表:各阴性样本不同试剂检测结果符合率和复检率

8131586733479603

在检测方法方面,各实验室使用的方法包括实时荧光RT-PCR、PCR-基因芯片、PCR-飞行时间质谱、转录介导的恒温扩增、数字PCR 和高通量测序方法(包括宏基因组测序),检测试剂包括NMPA 批准试剂以及实验室自建方法。

表. 各阳性样本不同方法检测结果符合率和复检率

39251586733479724

表. 各阴性样本不同方法检测结果符合率和复检率

21471586733479802

假阴性原因之一:单靶点试剂阳性率高于多靶点

根据上述质评报告可以看出,要求必须检出的最低浓度质控品(640拷贝/毫升)的检出率结果显示,单靶点试剂(华大)检出率为97.1%,而其余8个双靶点试剂的检出率58.3%~100%不等,平均检出率仅为85.4%,远小于单靶点的检出率,这就是前期新冠核酸检测假阴性的主要原因之一。

“其实,对于病原检测,并不是检测靶点越多越好。因为,引物探针之间是会干扰的,反应体系中引物探针数量越多,干扰越严重,灵敏度越低。目前较为成熟的病原体多靶点(多重PCR)核酸检测方法,虽方便易用,但因为相互干扰,其灵敏度明显低于单靶点(单重PCR)检测。比如通用型肠道病毒多重核酸检测试剂,只有单重PCR80%左右的临床敏感性。卫健委临检中心的这项全国性的新冠核酸检测试剂室间质评结果也表明,新冠也不例外,多重检测灵敏度明显低于单重检测。”上述诊断试剂专家表示。

截止4月8日, 国家药监局已批准17个新冠病毒核酸检测试剂。获批产品中,既有一个靶点(华大,仁度),也有两个靶点(伯杰、圣湘、达安等)或三个靶点(之江、复星等)。

根据国家卫健委2月21日发布的《新型冠状病毒实验室检测技术指南》(国卫办疾控函〔2020〕156号)规定,要求同一份样本双靶点(ORF1ab和N)阳性才能确诊;单靶标阳性的需要重新采样重新检测阳性的才能判定为阳性。但在临床应用过程中,实际效果如何呢?

“从武汉的8000多例临床样本检测数据显示,单靶点(无论是N基因还是ORF1ab基因),其阳性率均高于双靶点(ORF1ab和N)1.5%。”上述专家表示。

在疫情爆发初期,由于测序获得的病毒序列信息较少,对不同病毒株之间的序列差异了解不足,而临床又急需比测序更快速简单的核酸检测方法用于样本检测,以提升确诊速度。加之,早期开发的一些核酸检测试剂因为质量不过关,为了保证准确性,“推荐”采用双靶点同时双阳性为阳性的判读标准。现在看来,这一“推荐”虽然减少了误诊,却大大增加了假阴性带来的漏检。

假阴性原因之二:核酸提取方法

核酸提取试剂的质量也是检测成功的关键环节之一。本次质评中实验室使用的核酸提取方法包括手工-柱提取法、手工-磁珠提取法、自动化仪器-柱提取法、自动化仪器-磁珠提取法和一步法等,各实验室使用的核酸提取试剂种类超过40种。

“核酸检测从提取到完成扩增检测是一个体系,但是如此多的核酸提取试剂,各种不同的操作程序,各实验室的检测体系实际上并不相同。因此,即使采用同一核酸检测试剂,但由于核酸提取试剂的不同,检测的分析敏感性也必然会存在差异。”

有个别实验室所有阳性样本均未检出。

本文由作者自行上传,并且作者对本文图文涉及知识产权负全部责任。如有侵权请及时联系(邮箱:guikequan@hmkx.cn

人点赞

收藏

人收藏

打赏

打赏

我有话说

0条评论

0/500

评论字数超出限制

表情
评论

为你推荐

推荐课程


精彩视频

您的申请提交成功

确定 取消
×

打赏金额

认可我就打赏我~

1元 5元 10元 20元 50元 其它

打赏

打赏作者

认可我就打赏我~

×

扫描二维码

立即打赏给Ta吧!

温馨提示:仅支持微信支付!