2024 ESMO，精选TCR-T细胞疗法重要更新

欧洲肿瘤内科学会（ESMO）年会是全球最负盛名和最具影响力的肿瘤学会议之一。2024年ESMO大会已于9月13日-17日在西班牙巴塞罗那举行，ESMO大会涵盖基础研究、转化研究以及最新临床研究进展。这里TCRshows整理了在2024 ESMO摘要中关于TCR-T细胞疗法的一些更新，如有遗漏，欢迎在评论区补充。

1028P：一项关于个性化KSX01-TCRT疗法治疗晚期实体瘤及其机制的I期研究（NCT06150365）

南京科士华生物（TCRx Therapeutics）；中国医学科学院&北京协和医学院；安徽医科大学第一附属医院；广西医科大学第一附属医院

背景：T细胞受体（TCRs）特异性识别胞内抗原，表明其在实体瘤治疗中具有独特优势。传统的TCR T细胞疗法针对由固定的HLA等位基因呈递的特定抗原，导致目标患者群体有限。全个性化的TCR T细胞疗法作为一种创新疗法应运而生，以克服这一不足，但及时鉴定肿瘤反应性的个性化TCR在技术上具有挑战性。

方法：构建了一个包含单细胞组学数据和肿瘤反应性/非反应性标签的T细胞数据库。通过人工智能（AI）神经网络训练肿瘤反应性T细胞指纹。通过将患者的T细胞数据与指纹匹配，识别出患者个性化的肿瘤反应性TCR序列。为每位患者选择并呈现3个鉴定出的TCR序列。在淋巴耗竭后，患者接受KSX01-TCRT细胞治疗，剂量分别为5x10^9（剂量1）或1x10^10（剂量2）TCR T细胞。终点是安全性和初步疗效证据。

结果：目前，每个剂量水平纳入了3名患者。最常见的不良事件是中性粒细胞减少（4级，1/6）和白细胞减少（3级，2/6），这是由于淋巴细胞耗竭化疗引起的。未观察到细胞因子释放综合征(CRS)或免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)的证据。未报告与剂量相关的毒性。剂量1水平的客观缓解率（ORR）为33%（1/3），剂量2水平为67%（2/3）。两个剂量水平的疾病控制率均为100%。从活检到批次放行的制造时间在48天内，包括仅用10天完成TCR发现，这比之前报道的个性化neoTCR T治疗的时间大幅缩短（中位时间219天）。机制上，确认TCR T细胞浸润到肿瘤病灶，并通过治疗前后肿瘤活检的单细胞组学描绘了它们的细胞命运轨迹。

结论：AI驱动的TCR识别作为一种有前景的方法，显著缩短了个性化TCR T细胞疗法的药物制造时间。KSX01-TCRT耐受性良好，并为多种晚期实体瘤提供临床益处，不受HLA限制或靶标表达的影响。

1029P：针对突变KRAS的TCR修饰T细胞疗法的临床前开发

瑞典Anocca AB

背景：突变的KRAS仍然是一个亟待满足医疗需求的目标，特别是对于G12V和G12D突变。TCR修饰的T细胞（TCR-T）疗法通过自体T细胞修饰提供了一种精确的方法，可以直接针对实体瘤中的这些基础驱动事件。我们描述了针对HLA-A*11:01限制下的KRAS G12V进行治疗性TCR及其相应的IMP-ready TCR-T产品的临床前开发。

方法：采用基于细胞的方法，利用质谱法评估了突变KRAS/HLA组合中的有效表位。使用单倍型工程抗原呈递细胞（engineered antigen-presenting cells，eAPCs）和多聚体试剂从多个naïve供体CD8细胞中分离出候选TCR pools。通过接触实验使用工程化的TCR呈递细胞（engineered TCR-presenting cells，eTPCs）和正交癌细胞系筛选eAPCs来检测TCR的敏感性和特异性，这些eTPCs带有与TCR信号传导相关的报告基因。通过筛选表位变异eAPCs库和HLA特异性eAPCs分别评估了TCR的交叉反应性和异体反应性风险。使用符合GMP的过程创建了主要效应细胞。供体CD8细胞经过基因编辑，用选择标记恢复并扩增。效应细胞在体外和体内均进行了测试。

结果：从102个初始候选者中，使用HLA匹配的供体分离出了针对HLA-A*11和KRAS-G12V 10肽（VVVGAVGVGK）的选择性TCR。通过200个编码目标肽序列饱和点突变的eAPCs评估了潜在的交叉反应性。没有观察到与编码所有相关基因编码肽的微基因的eAPCs发生交叉反应。通过一组86种常见的HLA单倍型eAPC系评估了异体反应性，未检测到任何责任。基因编辑的TCR-T细胞对多种具有不同G12V表达水平和HLA密度的癌细胞系表现出特异性和强效的TCR介导的细胞毒性。单次输注TCR-T效应细胞导致移植了表达G12V-A*11癌细胞的NSG小鼠体内肿瘤负担的快速且持续清除。

结论：该TCR-T正在推进到计划中的临床试验。针对更多mutKRAS/HLA组合的额外TCR正在开发中。

Anocca是一家完全整合的生物制药公司，开发TCR工程T细胞（TCR-T）疗法库，以重新定义实体瘤和其他难以治疗的疾病（包括传染性和自身免疫性疾病）的治疗。其专有技术旨在大幅扩展TCR-T细胞疗法的开发，从而为最广泛的患者群体系统性地生成治疗方法，使免疫系统能够对抗最难治疗的实体肿瘤。

目前Anocca的TCR-T肿瘤管线有19个处于TCR发现阶段，15个是先导优化阶段（候选药物的选定），9个IND。

1043P：推进多维度 KRAS 突变特异性TCR库，采用3S TCR靶向G12D突变，以应对庞大的全球患者群体

德国Medigene AG

背景：KRAS基因是多种肿瘤类型中最常发生突变的致癌基因之一。在难以治疗的病症中，如胰腺癌、结直肠癌和非小细胞肺癌中，发现了高频率的 KRAS突变（mKRAS）。mKRAS长期以来被认为"无法成药"。2021年，首个G12C抑制剂获得 FDA 批准，这一突破性进展改变了这一状况。然而，单用mKRAS抑制剂显示出相当比例的无应答和累积耐药性，证实仍需额外的mKRAS特异性方法。我们描述了通过添加高度特异(specific)、敏感(sensitive)和安全(safe)（3S）的TCR 靶向G12D KRAS突变来扩展mKRAS特异性TCR库。当3S TCR结合共刺激开关蛋白（CSP）PD1-41BB时，可生成先进的TCR-T治疗方法，这些方法经过装甲和增强，能够克服免疫抑制的肿瘤微环境(TME)，并具有提高安全性和疗效的潜力。

方法：将多位健康供体的T细胞与负载mKRAS抗原的DC细胞结合，并在高通量功能筛选中进行检测，为比较提供了多种TCR序列。在受体T细胞中共表达特定的TCR和PD1-41BB CSP，评估其对肿瘤细胞的IFN-γ分泌和细胞毒性作用、肽敏感性、HLA异体交叉识别及脱靶毒性。高通量功能性筛选迅速确定了6个独特的G12V特异性候选TCR进行深入表征。

结果：mKRAS G12D特异性的TCR在各种HLA-A*11亚型中表现出对mKRAS G12D的高度特异性，具有高肽敏感性、强肿瘤识别能力和出色的安全性。这些特点与之前展示的mKRAS G12V 特异性TCR相符。还研究了PD1-41BB CSP对增强TCR-T功能的影响。下图D展示了前3名候选TCRs的临床前数据。TCRs与PD1-41BB CSP结合，通过我们的Jovi-Tag技术（WO2022/038115A1）在CD8+ T细胞中单独表达。TCR+PD1-41BB表达的CD8+ T细胞通过FACS分选富集，并在用anti-TCR Cβ1、anti-PD1和anti-CD8抗体染色后通过流式细胞术分析。所有实验中均使用未转导的细胞（UT）作为对照。

结论：我们不断增长的mKRAS特异性TCR库旨在覆盖不同的突变和多种HLA等位类型，目的是扩大适合治疗的患者群体。双层武装和使用PD1-41BB CSP增强TCR-T细胞可能特别有效，可以提高TCR-T细胞在敌对肿瘤微环境中的活性。结合mKRAS G12V特异性的3S TCR与PD1-41BB CSP装甲，增强T细胞功能，开发出克服恶劣TME挑战并改善患者预后的最佳TCR-T疗法。

除了上述mKRAS TCR-T，2024年9月5日Medigene宣布美国FDA批准MDG1015用于多种实体瘤适应症的IND申请。Medigene AG首席执行官Selwyn Ho表示："我们非常高兴能够通过我们的领先计划MDG1015实现这一里程碑，该计划强化了我们成为一家领先公司的雄心，为患有多种晚期实体瘤类型的患者提供一系列不同的TCR引导疗法。""在临床前研究中，MDG1015显示出强有力且持久的T细胞驱动的抗肿瘤活性，以及减轻PD-L1影响的能力，PD-L1是实体肿瘤微环境中存在的主要免疫抑制信号之一，阻碍了TCR-T疗法的有效性。FDA首次批准Medigene TCR-T疗法的IND申请，这是一项关键成就，我们期待着开始针对多种实体瘤的MDG1015 1期研究EPITOME1015-I，但需要额外资金。"

MDG1015是一种一流的第三代TCR-T疗法，靶向NY-ESO-1/LAGE-1a，具有天然和最佳亲和力3S TCR和HLA-A*02。通过添加专有的PD1-41BB CSP技术，TCR-T细胞得到进一步装甲和增强，并已表现出对表达不同水平PD-L1的肿瘤细胞的抗肿瘤活性显着增强，PD-L1是实体瘤微环境中最具免疫抑制作用的信号之一。重要的是，与第一代TCR-T疗法相比，MDG1015的生产将具有较短的6天细胞扩增期，从而产生更年轻、更健康的细胞，并可能显着减少给药期间所需的细胞数量，并且患者的静脉到静脉时间缩短约20天。这也导致了一种具有几乎纯的CD8+群体和非常高比例的干细胞具有干细胞样质量（~95%）的药物产品，这可能改善反应的持久性提高、疗效增强并减少不良事件。

高水平的IFNγ产生即使在低水平的抗原和不同水平的PD-L1情况下也是如此：

MDG1015的表现优于'裸露'的TCR：

Medigene的TCR-T细胞应对当前TCR-T疗法的挑战：

1044P：UniTope & TraCR：整合于TCR恒定区的通用标记和追踪系统用于TCR-T细胞

德国Medigene GmbH

背景：在产品开发、GMP生产、产品质量控制和患者样本免疫监测中，通常采用三种方法来识别TCR-T群体中的rTCR表达：①检测与rTCR共表达的额外标签；②使用特异性识别TCR Vβ链的抗体进行结合；或③使用肽-HLA多聚体进行rTCR结合。后两种方法必须针对每种rTCR进行定制，并且高质量的试剂可能不易获得。

方法：使用生物信息学和TCR的3D建模，设计了新的合成表位，并将其插入到多个rTCR序列的不同位置。对内部标记的rTCR进行了表面表达、功能和靶向特异性的评估，同时还评估了检测不同长度合成表位的抗体（TraCR）的结合情况。

结果：确定了一个独特的合成表位（UniTope）和位于rTCR恒定区域中的最佳插入位点，这使得TraCR抗体能够高度特异性地检测。UniTope与TraCR的组合明确地区分了受体T细胞中表达的rTCR和PBL中存在的所有内源性TCR。整合的UniTope标签仅结合TraCR抗体，并且不会改变所评估的任何rTCR的功能性、已建立的安全性概况或表达水平。

结论：UniTope & TraCR是一种通用的检测系统，适用于多种参数流式细胞术。UniTope无缝集成到任何rTCR结构中，无需共表达单独的基因序列即可普遍标记rTCR表达的T细胞。提供标准化的检测系统，UniTope & TraCR简化了TCR-T疗法的质量控制检测供应和验证，覆盖所有rTCRs，并为药物产品的剂量提供精确信息。它允许轻松可视化、分离和富集TCR-T细胞以进行直接研究。GMP级TraCR可用于药物产品富集，并且还可能用于追踪TCR-T细胞在体内的定位和持久性，支持患者的免疫监测。UniTope & TraCR 系统是一种高精度技术，可促进TCR-T疗法的优化开发。

2024年5月28日，Medigene AG 通过向欧洲专利局提交三项专利来扩展其端到端平台。第一项专利申请涵盖了公司创新的IFNγ生物传感器，该技术能够实时监测和量化分泌细胞因子的IFNγ释放。专有技术通过利用简化且高效的细胞术检测方法更好地了解免疫反应动力学。IFNγ生物传感器技术克服了当前可用商业工具的局限性，这些工具通常成本高昂、耗时，并且由于复杂的程序而容易出错，从而降低了可重复性。此外，传统方法通常只允许终点测量，不支持长时间实时监测IFNγ，而使用该IFNγ生物传感器可以实现。第二项和第三项专利是高精度TCR跟踪（UniTope和TraCR)，为其新型TCR特异性抗原-抗体组合技术UniTope和TraCR申请了两项专利。该技术结合了一对工具，旨在唯一标记TCR并准确跟踪其位置。这反过来又允许精确评估TCR指导的细胞疗法的增殖、持久性和定位，无论是在体外还是体内研究，从而为细胞疗法的疗效和机制提供关键见解。

1085P：一项正在进行的I期试验：针对MAGE-C2阳性黑色素瘤的TCR基因改造T细胞进行过继细胞治疗（NCT04729543）

荷兰伊拉斯姆斯医学中心（Erasmus Medisch Centrum）

背景：MAGE-C2（MC2）是一种免疫原性的癌症胚系抗原，在黑色素瘤中高度表达，但在正常组织中不表达。为了进行过继性T细胞治疗，选择了一种高特异性的TCR，并开发了一种生成年轻MC2 TCR T细胞的方法。这项首次人体一期试验的主要目的是确定推荐的II期剂量，并证明使用自体MC2 TCR T细胞治疗的安全性和可行性。次要目的包括评估治疗效果以及在血液和肿瘤组织中测量MC2 TCR T细胞和免疫参数。

方法：这是一项研究者发起的单中心临床试验，采用加速滴定法进行5个剂量级别的递增，最高可达5.0x10^10 MC2 TCR T细胞。晚期黑色素瘤患者在标准治疗后病情进展，并且具有HLA-A2基因型及MC2阳性肿瘤的情况下符合入选条件。在输注通过白细胞分离获得并加工为高级治疗性医药产品（ATMPs）的T细胞之前，患者需接受表观遗传药物丙戊酸和5-氮杂胞苷的治疗。输注MC2 TCR T细胞时辅以低剂量IL-2给药。根据CTCAE v5.0记录不良事件（AEs），并根据RECIST v1.1评估肿瘤反应。

结果：到目前为止，已有6名符合条件的患者接受了治疗，其中包括虹膜（n=3）和黏膜（n=3）黑色素瘤患者，成功制备了T细胞ATMPs分别接受了前四个剂量（5x10^7, 5x10^8, 5x10^9 和 1x10^10 MC2 TCR T细胞）。另外2例T细胞ATMPs因较低剂量而特别放行，有助于优化生产方案。在最高给药剂量下，未观察到不可逆的3级或4级AEs。在第二个剂量水平观察到了混合的肿瘤反应。对于更高的剂量水平，正在等待疗效评估。MC2 TCR T细胞在输注后最长可在血液中检测到6个月。

结论：生产MC2 TCR T细胞ATMP是可行的。MC2 TCR T细胞与表观遗传药物和低剂量IL-2联合治疗未导致剂量限制性不良事件，并且耐受性良好。预计II期临床试验的推荐剂量至少为1x10^10个TCR T细胞，计划进行一项国际多中心研究，并集中生产T细胞ATMP。