His标签单抗简介

His 标签单抗，也常被称作 6×His 标签单抗或 6×His 单克隆抗体，其英文全称为 anti-6His tag monoclonal antibody。由于制备该单抗的实验动物多选用小鼠，所以小鼠来源的 His 标签抗体英文全称为 Mouse anti-6His tag monoclonal antibody。

以实验小鼠为宿主制备的 His 标签单抗即为 His 标签鼠单抗，其制备有着相对固定的流程。首先人工合成 6*His 多肽，该多肽的氨基酸序列为 HHHHHH，必要时还会在其末端添加偶联载体所需的特殊氨基酸。多肽合成完成后，通过化学方法将其与 KLH、BSA、OVA 等载体蛋白进行偶联。偶联后的全抗原用于免疫实验小鼠，免疫结束后，处死免疫后的小鼠，在无菌条件下取出其脾脏，将脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合。之后借助 ELISA 等手段筛选出阳性克隆，对筛选到的细胞进行克隆化处理，便可形成稳定的细胞株。将此细胞株进行体外培养，或者在小鼠体内诱生腹水，随后从培养基或腹水中纯化得到 His 标签鼠单抗，最后再通过 Western blot 等手段对其进行鉴定。

在蛋白质重组技术中，His 标签是一种常用标签，其序列为六个组氨酸（HHHHHH）。它具有诸多优势：分子量小，基本不会改变蛋白质的生物结构和溶解性，更重要的是能极大简化蛋白质的纯化过程。基于组氨酸上的咪唑环可与二价金属离子结合的原理，人们可利用金属离子亲和层析技术纯化带有 His 标签的蛋白。具体操作是将含有目的蛋白的裂解液通过固定有二价金属离子（通常为二价 Ni 离子）的填料，此时带有 6*His 标签的蛋白质会与填料结合，而其他蛋白则不发生结合，最后使用高浓度的咪唑就能将目的蛋白洗脱下来。

His 标签单抗的用途广泛，可用于鉴定 His 标签蛋白质的表达情况，比如目的蛋白的相对表达量、分子量等；还能用于确定其在细胞中的定位，以及研究该蛋白质的其他特性。