蛋白纯化磁珠/试剂盒——高效捕获目标分子

实验原理

蛋白纯化磁珠/试剂盒基于特异性生物分子相互作用实现目标分子的精准捕获与纯化。磁珠表面修饰有高亲和力的配体（如抗体、链霉亲和素、His标签结合基团等），可与目标蛋白特异性结合。例如，抗体偶联磁珠通过抗原-抗体结合原理选择性吸附目标蛋白，而链霉亲和素磁珠则利用生物素-亲和素的高亲和力捕获生物素化分子。

结合后，通过磁力分离技术快速将磁珠-目标分子复合物与杂质分离，再经洗涤去除非特异性吸附，最终通过改变缓冲液条件（如pH调整、竞争性洗脱）释放高纯度目标产物。该技术兼具高效、温和、可自动化等优势，适用于复杂样本（如血清、细胞裂解液）中微量目标的纯化。

实验步骤（以抗体偶联磁珠为例）

1、样本预处理

离心去杂：将样本（如血清）以3000g离心10分钟，去除细胞碎片或颗粒物。

裂解（可选） ：若目标为细胞内成分，使用裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂）处理样本，超声破碎后离心取上清。

2、磁珠孵育

磁珠活化：涡旋混匀磁珠悬液，取适量磁珠置于离心管中，用预冷PBS洗涤2次以去除储存液。

结合目标分子：将预处理样本与磁珠混合，室温旋转孵育30分钟，确保充分接触。

3、磁分离与洗涤

磁吸去上清：将离心管置于磁力架上静置2-3分钟，待溶液澄清后吸弃上清。

洗涤杂质：加入洗涤缓冲液（如含0.1% Tween-20的PBS），轻柔重悬磁珠，重复磁吸步骤2-3次以去除非特异性结合。

4、目标分子洗脱

竞争性或条件洗脱：

酸性洗脱：加入低pH缓冲液（如pH 2.8甘氨酸-HCl），孵育5分钟，中和后立即转移上清以保护目标活性。

生物素竞争：对于链霉亲和素磁珠，加入过量游离生物素竞争性解离目标分子。

磁珠再生（可选） ：部分试剂盒支持磁珠再生，通过去离子水、再生缓冲液处理后可重复使用。

总耗时：约60分钟，批间差异<5%，回收率可达90%以上。