重组抗体高效表达秘籍

抗体药物的发展经历了鼠源单克隆抗体、人-鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体等阶段，在抗肿瘤、抗自身免疫疾病、抗感染及生物传感器等领域都具有较好的应用前景。随着分子生物学技术的不断发展，利用基因工程重组抗体蛋白、构建抗体药物偶联物及哺乳动物细胞大规模培养等生产技术推动抗体工程进入了一个全新的时代。

重组抗体又叫基因工程抗体，是利用DNA和蛋白质工程技术，在基因水平上对免疫球蛋白分子进行适当加工改造，重新装配导入受体细胞后表达出来的抗体分子。与传统的单克隆抗体和多克隆抗体相比，重组抗体具有独特的优势，现已被广泛地应用在科学研究、免疫诊断及治疗性抗体领域。

重组抗体优势

周期短：重组抗体在数周即可生产，而杂交瘤抗体制备需要数月；

一致性高、重复性好：重组抗体的基因是确定的，抗体生产是可控且可靠的，使得抗体的批次间差异小，重复性好；

灵敏度和特异性高：基因工程改造，利用重组技术选择的抗体更优质；

免疫原性低：无需免疫和筛选；

大规模抗体制备：可实现无动物体外生产。

重组抗体的表达须遵循两个基本原则：

1.保持抗体亲和力和特异性，尤其不能丧失抗体特异结合抗原的能力；

2.应当降低或消除抗体的免疫原性。

哺乳表达系统高产量pATX系列载体及驯化293系列和CHO系列细胞，能实现全长抗体以及多种形式的重组抗体片段的高效分泌表达；无需免疫和筛选，直接利用抗体基因序列即可实现重组抗体的高产和可重复生产。

重组抗体在哺乳动物细胞中的高效表达有赖于高效表达载体的构建、抗体基因序列的优化、抗体稳定细胞株的筛选、表达宿主细胞的改造及细胞培养工艺的优化等。

1.单克隆抗体测序：

提供杂交瘤细胞单克隆抗体的测序，周期短，实现重链轻链基因全面分析。

2.质粒构建：

经密码子优化及基因合成，采用公司自有的哺乳表达系统pATX系列载体，优化实现高产量表达。

3.抗体表达及纯化：

驯化成熟的293系列和自主产权的CHO-K1细胞系，实现抗体高效表达纯化。

4.稳定细胞株：

成熟的稳定细胞株筛选平台，产量可优化到克级；长期稳定传代表达，抗体质量稳定。

案例展示

Expression caseⅠ: scFv

Expression system：B.subtilis Expression System

Figure 1.1 Target scFv purification profile.Figure 1.2 Final sample QC. 

Conclusion:Total obtained 37mg scFv from 1L scale up purification, purity>90%.

Expression case Ⅱ: Bi-specific Antibody

Expression System：Mammalian 293F Expression System

Figure 2.1 Target protein purification profile.  Figure 2.2 Final sample QC.

Conclusion: Bi-specific antibody A total obtained 17.35mg per liter of culture, purity> 90%. Bi-specific antibody B total obtained 16.23mg per liter of culture, purity> 85%.

Expression case Ⅲ: IgG-like bi-specific antibody

Expression System：Mammalian CHO-S Expression System

Figure 3.1 Target protein purification profile.  Figure 3.2 Final sample QC.

Conclusion: Total obtained IgG-like: 104mg from 1L scale up purification, purity> 90%.

Expression case Ⅳ: IgG (Human)

Expression System：Mammalian 293F Expression System

Figure 4.1 Target protein purification profile.  Figure 4.2 Final sample QC.

Conclusion: Total obtained IgG: 80mg from 1L scale up purification, purity> 90%.

Expression case Ⅴ: IgG2a (mouse)

Expression System：Mammalian CHO-S Expression System

Figure 5.1 Target protein purification profile.Figure 5.2 Final sample QC.

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