耳聋基因检测技术现状

文章来源：融智生物

耳聋是致残性疾病，严重影响人们的沟通交流及生活质量。有统计数据显示，约60％的重度耳聋为遗传性耳聋，这种类型的耳聋目前尚无有效的治疗方法。因此，减少遗传性耳聋的发生重在早期预防及干预，其中，明确耳聋病因是关键。分子诊断是目前检测遗传性耳聋基因突变位点的主要方法，它可以在分子水平明确耳聋病因，实现遗传性耳聋的辅助诊断，为遗传性耳聋的精准治疗及精准预防提供理论基础。随着基因诊断技术的进步，耳聋基因检测技术种类越来越多，今天，小融就带大家一起来了解一下各种类型的耳聋基因检测技术。

1.基因芯片技术  

基因芯片技术于1995年被首次提出，该技术利用微阵列方法，将检测探针通过光刻原位合成或点样技术固定在芯片上，待测基因经扩增、荧光标记后与芯片杂交，最后通过激光共焦扫描及分析软件判读结果。

基因芯片技术高通量、微型化、自动化，结果易判读，是目前临床应用比较广泛的耳聋基因检测方法，但该技术的不足之处是：对DNA质量要求高、可检测的突变位点有限，固相基因芯片信噪比较高、结果判读需依赖昂贵扫描仪，这些都限制了芯片法在临床的开展普及。

2.新一代测序（NGS）技术  

新一代测序技术，又被称为“高通量测序技术”。NGS通过提取基因组DNA，将序列打断至一定的长度，进行文库制备，按照测序流程捕获目的DNA片段，通过富集纯化进行测序。NGS技术能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，就耳聋基因研究和基因诊断而言，基于靶向捕获和高通量测序，可针对绝大多数已知耳聋基因进行一次性全序列突变检测。

相比第一代测序技术，二代测序技术具有更高的位点通量的优点。但其检测出的未知突变是否与耳聋相关，需大量数据和生物信息学分析手段来判定。

3.实时荧光检测技术

在耳聋基因检测中，采用实时荧光检测技术的检测方案包括采用多色溶解探针检测技术（MMCA）、基于Taqman 探针的实时荧光检测技术。MMCA 的原理为针对突变位置设计引物和标记探针，根据探针结合时的溶解温度曲线对目标位置进行基因分型。采用实时荧光检测操作可以有效避免PCR扩增产物的污染，若配合自动化判读软件，则判读结果相对简单。但是该方法单管检测突变位点具有局限性，当检测的目标位点突变较多时，需要使用较多的检测管方可完成单样本分析。若单批次的待测样本较多时，需要多台的PCR仪同时参与检测，该方法检测位点通量相对较低，因此更适合小型实验室采用。与MMCA 相比，基于Taqman探针的实时荧光检测技术的检测位点通量更低，因此基于Taqman探针的实时荧光检测技术更适合用于特定突变点的验证。

4.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）

MALDI-TOF MS技术由于其“软电离”的原理，非常适合核酸、蛋白、多肽等生物大分子的检测，已经在化学、生物、医疗卫生等众多领域得到广泛应用。MALDI-TOF MS技术用于核酸检测的基本原理是：根据靶向序列（目标位点）设计PCR扩增引物，将提取好的核酸样本进行多重PCR扩增；扩增产物用特异性的质量探针进行单个碱基的延伸反应；延伸反应产物存在分子量的差异，该差异即延伸反应结合的单个碱基的分子量，利用核酸质谱对延伸产物进行检测，区别开延伸前后分子量的差异，从而得到核酸分型结果。

MALDI-TOF MS法样本通量高，一台仪器每日通量高达3000例，单样本一次上样可同时检测数十个位点，高效准确，能满足大量样本检测的需求，且仪器操作简单，对人员技术要求低，适合第三方医学实验室等样本量较多的场景使用。

  # 参考文献 #    

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