BTK抑制剂筛选平台

BTK功能：BTK是酪氨酸激酶TEC家族成员之一，能够调节B淋巴细胞发育、分化及信号传导.BTK的结构与功能活化机制，使得BTK成为一个具有广泛目标疾病的靶点，如B细胞恶性肿瘤、哮喘、风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等。

BTK活化的机制：BTK迁移到细胞膜上，当细胞膜上的一些活化的受体会募集并磷酸化胞内的信号转导激酶PI3K，磷酸化的PI3K随后将膜上的PIP2转化为第2信使PIP3。PIP3结合到BTK的PH结构域，BTK随后会被募集到细胞膜，随后Tyr-551残基被Syk和Lyn激酶磷酸化。BTK接着在Tyr-223残基进行自磷酸化反应从而具备生理活性（图1）。

BTK作为B细胞受体的关键部分，其高表达导致通路过度活跃，B细胞恶性增殖，诱发血液肿瘤。抑制BTK可抑制B细胞活化、增殖和存活，进而抑制B细胞淋巴瘤的生长。

自2013年底由强生公司和 Pharmacyclics 公司联合开发的全球首款获批的 BTK 抑制剂伊布替尼开始， 针对BTK的药物研究从未停止。全球目前已经获批的3款BTK抑制剂于2019年的市场规模已超过80亿美元。另外，BTK抑制剂的适应症仍在不断拓展中，除抗肿瘤外，自身免疫疾病的应用将把BTK抑制剂推向另一个市场高度。

目前国内相继研发BTK的多种小分子抑制剂，并在体内及体外试验中均表现出良好的抗肿瘤作用，如2020年6月3日由百济神州自主研发的新一代BTK抑制剂百悦泽（泽布替尼胶囊）已于6月3日获批上市，成为我国首个获得美国FDA批准在美上市的本土研发抗癌新药、国内首个上市的国产BTK抑制剂，同时6月15日泽布替尼胶囊实现商业化供应，泽布替尼服务开始正式我国淋巴瘤患者。

截止2020年6月已有16种中国创新药物进入或完成临床实验（表1）

为了助力下一代BTK抑制剂的研发，科途医学建立了完善的BTK抑制剂筛选平台，提供包括生化药理实验、细胞药理实验、小鼠体内模型试验、药代动力学和药效动力学实验等在内的一系列临床前药理、药效技术服务，可准确、快速、高效的筛选出具有抑制BTK激酶活性的BTK抑制剂。

◆ 生化药理实验

体外构建激酶（BTK，ITK，Tec）反应体系中，评价待测化合物的半抑制浓度，评价激酶磷酸化底物的抑制作用和生化选择性。

◆ 细胞药理实验

测定药物对多种血液癌细胞活力的抑制能力：采用CellTiter-Glo®荧光素细胞存活率检测方法（Promega）测定，用于该评价的血液癌细胞系（表2）。

◆ 细胞药效动力学实验

1. 测定细胞BTKpY223、PLCγ2、ITK等多种激酶磷酸化蛋白表达水平

2. BTK占据实验定量检测待测药物与细胞中BTK蛋白的结合能力

◆ 体内实验：淋巴瘤皮下模型药效实验

1. 小鼠异种移植REC-1套细胞淋巴瘤皮下模型及药效检测

2. 小鼠异种移植TMD-8弥漫大B细胞淋巴瘤皮下模型及药效检测

◆ 小鼠PK和PD模型

1. 小鼠血药浓度测定

2. 小鼠PBMC和脾脏BTK占据水平测定

用于耐药突变工程化改造及药物检测的细胞株

注：药物不可逆抑制剂处理后，可能引发获得性耐药，其中T474（ a gatekeeper residue,）位置和C481（共价结合氨基酸）位置的突变，会导致细胞对药物产生耐药。